STORM超高分辨/尼康A1共聚焦/全内反射显微镜

仪器介绍：兼具STORM超高分辨，尼康A1共聚焦，全内反射三大功能（1）功能：多色荧光叠加、3D重构（Z-Stack）、荧光共定位、时间序列、Fret、FRAP。 配置倒置研究级电动显微镜；活细胞工作站；电动载物台；第三代完美对焦系统；激光器：405nm、488nm、561nm和640nm。 N-STORM：可实现超分辨成像（STORM，分辨率可达20 nm），共聚焦成像，TIRF成像。（2）计费：Storm：校外/校内/-800/600/元/时，院内150/元/时，共聚焦&全内反射：校外/校内/-600/300/元/时，院内120/元/时，最短计费一小时，超出部分，以半小时为单位计算。详情咨询管理员

应用领域：生命科学、生物医学、临床医学诊断和材料科学等领域

使用指南：开机顺序及要点： 1. Ti显微镜、Ti显微镜载物台控制器、piezo Z载物台控制器一般情况下常开，请勿不需要关闭。 2. 先开启激光台钥匙，再开启需要使用的激光器开关。 3. 开启647nm激光器总开关（1’），看到SHG处黄灯亮起，待黄灯等到变成绿灯后，开启647nm激光器钥匙（2’）。 4. 开启电脑，在桌面上找到“Laser 647”软件 ，将软件中的key由“OFF”变为“ON”（箭头a所指），待激光功率由0变至20mV时（箭头c所指），将激光输出功率逐渐增高（例如：20—50—100—150—200，箭头b所指），待功率升至200mV时，可将该软件关闭。 5. 开启“NIS”拍摄软件，进入选择“Andor with N-Storm”拍摄系统。 6. A1控制器在需要拍摄confocal图像时开启，只使用STORM系统时不需开启。 成像步骤： 1. 正确放置样本，找到合适焦平面，确定良好视野。 2. EMCCD的设置：工作温度需在-69—70℃之间；EM Gain 10MHz at 14bit；Exposure为1 frame；EM Gain Multiplier（30） X Conversion Gain（4.9x）≈150。 3. 先将647nm的激光功率调低至0.5%，再将shutter打开，点击打开live窗口，调节到合适焦平面。 4. 将647nm激光功率调至100%，使视野呈现闪烁状态。 5. 调节TIRF角度，在3D-STORM模式中，当live视野的闪烁点最多时，为TIRF最大角，最终将角度设置的略小于TIRF最大角即可；在2D-STORM模式中，则需将角度调节至与TIRF角重合。 6. 在Active Laser的激光器前插入ND片 ，在软件上分别设定Active Laser的初始功率，勾选激光通道，看到live窗口的视野闪烁的点是否增强，并且强度合适，打开后应立即关闭，以防样本被漂白，若闪烁无增强，则调高功率，再重复上述，直至功率合适。 7. 设置period count的次数，选取合适的储存路径，勾选“Storm image”和“Graph”，,点击“Run Now” 。 8. 出现一个对话框对焦面进行校对 ，需调节焦面先确定样本最底部的焦平面（step1），点击“OK”，后确定目标焦平面（step2），点击“Yes”，,扫描正式开始。 9. 注意观察Active Laser 的功率值，当功率达到100%时，点击“Auto LP” ，将激光功率调至0%，拔出激光器前的其中一个ND片，再设定合适的激光功率初始值，再点击“Auto LP”，继续拍摄。 10. 当荧光单分子基本已不再增加时，可终止成像，成像完成。 关机顺序及要点： 1. 关闭NIS软件。 2. 打开Laser 647软件，将200mV的激光功率逐渐降至20mV(200→150→100→50→20)，再将“ON”状态打到“OFF”状态，退出软件，关闭激光器钥匙，最后关闭激光器总电源。 3. 关闭相应激光器。 4. 关闭激光台钥匙。 5. 关闭电脑。

管理规则：yinwei5651@zju.edu.cn

实验规则：请至少提前两天预约，STORM样品需特殊制备，预约前请联系管理员，88206270 yinwei5651@zju.edu.cn。

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1.第一次做storm的同学，请与管理员联系沟通 2.共聚焦功能正常使用，收费同尼康共聚焦收费标准。

最小可预约时间段： 60 分钟

最大可预约时间段： 240 分钟

最近提前预约时间： 30 分钟

最远提前预约时间： 72000 分钟

最大有效预约次数： 4 次 / 周

预约保护时间： 15 分钟

预约失约时间： 15 分钟

无代价提前撤销预约时间： 1440 分钟

提前撤销预约扣除信用分： -4 分

预约失约扣除信用分： -10 分

仪器使用超时保护时间： 5 分钟

普通超时扣除信用分： -1 分

挤占他们预约扣除信用分： -4 分

暂无信息