倒置激光共聚焦显微镜与活细胞工作站

仪器介绍：(1)激光波长：405、488、561、635nm，。 (2)倒置荧光显微镜（物镜：10X，20X，40X，油镜60X，油镜100X；明场DIC (3)功能：多色荧光叠加、3D重构（Z-Stack）、荧光共定位、时间序列（长时间序列）、光谱扫描及拆分。（4）计费：目前优惠价格，单光子，校外/校内150元/时，院内60元/小时。最短计费一小时，超出部分，以半小时为单位计算。详情咨询管理员

应用领域：细胞形态定位、立体结构重组、动态变化过程等研究，并提供定量荧光测定、定量图像分析等实用研究手段，结合其他相关生物技术，在形态学、生理学、免疫学、遗传学等分子细胞生物学领域得到广泛应用。

使用指南：倒置双光子共聚焦显微镜与活细胞工作站操作流程 一、 开机顺序 查看实验记录，确认是否能马上开机，确认后按照以下顺序开机，务必本着“先开电源，后开钥匙”“先开硬件，后进软件”的原则。 1、 打开主扫描控制器（先开电源，后开钥匙）和显微镜控制器（只开电源）开关； 2、 打开激光器（除MCPSU综合激光器405、635必开之外，其余只开启需要使用的激光器）。 1） MCPSU半导体综合激光器（LD405应用染料：DAPI/Hoechst/BFP等；LD635应用染料：CY5/Alexa647等）。 2） LD559激光器（注意：电源打开后，等待TEMP指示灯不闪烁后，再开启钥匙，红色指示灯不闪烁后，方可正常使用）。 3） 氩离子多线激光器（458/488/515，应用染料：GFP/FITC/Fluo3/Alexa488/CFP/YFP等）。 3、 打开SIM双扫控制器（先开电源，后开钥匙）。 4、 打开电动载物台控制器，绿色按钮。 5、 打开荧光汞灯（开启后，30分钟内勿关）。 6、 打开电脑主机，登陆windows xp系统，输入密码，双击共聚焦软件，打开FV10-ASW应用软件 ，输入软件密码进入主程序。 二、 实验操作 1、获取二维图像：FV10-ASW软件中点击汞灯观察按钮 ，打开汞灯快门，倒置显微镜下观察标本聚焦,关闭汞灯快门，点击 添加荧光染料设置光路。按focusX2键快速预览，调整激光器Laser透过率、光电倍增管电压PMT、降噪调整offset等至最佳状态，为防止串色，尽量选用sequencial序列扫描模式，降低扫描速度，获取图象并保存。 2、获取三维图像：激光扫描共聚焦显微镜具有细胞“CT”功能，因此，它可以在不损伤细胞的情况下，获得一系列光学切片图像。选用“Z-Stack"模式，即可实现此项功能。其基本步骤是：① 选择depth，出现XYZ，即开启“Z-Stack”选项；② 调整焦距，确定光学切片的top和bottom位置，设置扫描步径及层数；③ 启动“XYZ”，获得三维图像。 3、获取时间序列图像 ：共聚焦显微镜的"Time-Series"功能，可以自动在实验者规定的时间内按照设定的时间间隔获取图像。只需设定所需的时间间隔及所需图像数量，开启“XYT”功能键，即可进行实验。 三、关机顺序 1、刻录数据：拍摄好的图像保存后，退出软件，刻录数据。（请注意必须用本机专用的光盘，严禁使用U盘，移动硬盘）。 2、关机原则：“先退软件，后关硬件”；“先关钥匙，后关电源”。 3、关闭荧光汞灯（注意：开启后30分钟内勿关）。 4、关闭激光器（特别注意氩离子多线激光器，先关钥匙，千万别马上关闭电源，等风扇停止转动后大约需要8-10min，再关闭电源）。 5、使用擦镜纸沾取无水乙醇擦拭显微镜物镜，并把物镜降低到最低点，调至空位。 6、关闭荧光的shutter。 7、关闭扫描控制器和显微镜控制器。 8、等待仪器冷却后，盖上防尘罩，并做好实验记录登记。 四、注意事项 1、 严格遵守激光器的开、关流程，尤其是559、488nm激光器。 2、 如果使用过油镜，或者物镜表面较脏，则需用擦镜纸擦干净物镜的前表面，清洁液使用100%无水乙醇。 3、 不使用荧光时，不打开汞灯开关。汞灯开、关间隔时间至少30分钟以上。 4、 刻录图像数据资料：应使用刻录光驱刻录，实验前应准备好刻录光盘。 切记：为了防止计算机病毒，严禁在共聚焦电脑上使用U盘、硬动硬盘或者上网！数据仅保存3个月，请及时拷贝！ 5、 未经授权，严禁自行安装任何软件！ 6、 实验室温度应保持在22℃±2℃，湿度40%-60%。 7、 整个实验过程应注意保持显微镜周围环境清洁。 8、 实验过程中产生的垃圾或者废液请自行清理至垃圾桶。 9、 实验前拉上遮光布帘，以避免样本荧光淬灭及杂光干扰。 10、 未获得独立操作资格者严禁自己开关机，开关机由仪器管理员进行。 11、 整个成像公共技术平台配备完善的实时监控，请按规则进行实验，一旦出现问题请及时上报。

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